Исследование свойств пыльцы

[Admin]

Исследование иммуносерологических свойств пыльцы

Методы


1) Получение антител из водо — и жирорастворимых вытяжек.

Использовали кроликов-самцов весом около 2,5 кг, которых иммунизировали указанными ниже дозами. 10 дней спустя после первой инъекции брали кровь и отделяли сыворотку для определения антител.

Группа А (дача водорастворимого экстракта):

1 — кролик весом 2,400 кг ; 2 мл водорастворимого экстракта на кг (30 мг/мл) инъецировали в вену 3 раза в неделю, в течение Двух недель (общая доза 360 мг/кг) ;

2 — кролик весом 2,500 кг — то же самое;

3 — кролик весом 2,500 кг — 0,05 мл (16 мг) водорастворимого экстракта (300 мг/мл) инъецировали в лапки, в 5 точках (всего 4 раза) ;

4 — кролик весом 2,400 кг — то же самое.

Группа Б (дача жирорастворимого экстракта):

1 — кролик весом 2,600 кг — 0,05 мл (36 мг) жирорастворимого

экстракта инъецировали в лапки в 5 пунктах (2 раза в неделю, всего

4 раза) ;

2 — кролик весом 2,500 кг — то же самое ;

3 — кролик весом 2,400 кг — то же самое.

[Admin]

2) Природная устойчивость к водо — и жирорастворимым экстрактам. (Анафилактический шок у морских свинок).


Водо — и жирорастворимую вытяжки инъецировали подкожно в лапки 10 морским свинкам весом примерно по 250 г., всего 4 раза (каждый раз по 14 мг). Две недели спустя после первого инъецирования антигены (15 мг/мл) вводили внутривенно для

симулирования анафилактического шока.

3) Естественная сопротивляемость водо — и жирорастворимым вытяжкам (явление Артуса: кролики).

Для иммунизации кроликов согласно методу (1) им подкожно дорзально 0,1 мл антигена (15 мг/мл, 3 мг/мл и 0,6 мг/мл), сбрив предварительно мех. 10 дней спустя после последнего инъецирования появились красные пятна и затвердения.

[Admin]

4) Определение антител.


А — Реакция преципитации: сыворотку от иммунизированных кроликов, полученную методом (1), активизировали (56°С в течение 30 минут) и получили ряд разбавлений с соленым 5%-ным физиологическим раствором гуммиарабика. По обычному методу правели реакцию преципитации водо — и жирорастворимых вытяжек пыльцы.

Б — Реакция гемагглютинации: иммунизировавшую антисыворотку, полученную методом (1), изучали согласно тесту агглютинации для сенсибилизированных частиц, используя для их сенсибилизации водо — и жирорастворимые экстракты пыльцы. Сенсибилизированные частицы обрабатывали таким образом, чтобы они поглощали неактивированную противосыворотку, их сначала обрабатывали таниновой кислотой и добавляли к сериям разбавлений дозами 0,05 мл после предварительной сенсибилизации антигенами (1 мг/мл в случае жирорастворимого экстракта и 0,1 мг/мл в случае жирорастворимого, разбавленного или суспензированного в буферном растворе фосфата с рН 6,2).

Растворы анализировали после того, как полученные таким образом антисыворотки выдерживали при 37°С в течение 2 часов и при комнатной температуре в течение 20 часов.

В — Реакция гель-преципитации. Тест проводился по методу Оухтерлони. Полученную методом (1) антисыворотку использовали как контрольную, применяя в качестве антигенов водо — и жирорастворимую вытяжки.

[Admin]

А) Серологический анализ сыворотки кроликов, иммунизированных водо — и жирорастворимыми вытяжками пыльцы. Провели анализ сыворотки 7 кроликов, иммунизированных методом.


Результаты были отрицательными во всех случаях, что доказывает отсутствие антител.

Б) Результаты теста реакции гемагглютинации были получены по методу (4).

Величины агглютинации сыворотки кроликов группы А — (иммунизированных водорастворимым экстрактом) были 160—320. Для частиц, сенсибилизированных жирорастворимым экстрактом, размеры были довольно большие — 40—80. Сыворотка кроликов группы Б, иммунизированных жирорастворимым экстрактом) не агглютинировала ни с частицами, сенсибилизированным водорастворимым экстрактом, и с жирорастворимым.

ни с жирорастворимым.

В — Реакция гель-преципнтина (метод Оухтерлонн). Тест для преципитинов был проведен согласно методу Оухтерлонн, антисыворотками (группа А — 4 случая, группа Б — 3 случая) расположенными в центральной области и антигенами — в периферийной. При проявлении негативов ни в одном случае не обнаружили полос преципитата.

Б) Естественное сопротивление водо — и жирорастворимым экстрактам.

А — Анафилактический шок (морские свинки). Каждой морской спинке вводили внутренне антигены (15 мг/мл) в дозе 1 мл. Свинок сенсибилизировали согласно методу (2) и следили за появлением анафилактического шока.

КНи в одном случае анафилактического шока не появилось и все особи выжили.

Б — Явление Артуса (кролики).

Кроликов иммунизировали согласно методу (1).Им собрали мех и подкожно вводили антигены (0,1 мл) в 6 пунктах, следили за появлением красных пятен и затвердений.

По результатам видно, что появляеться легкое покрасненеи на подкожном ингъицированнии водорастворимого экстракта концентрации 15 мг/мл, кроликам, иммунизированным водорастворимым экстрактом.

Затвердений, некроза или кровоизлияния не появлялось.

[Admin]

Изучались с иммунологической и серологической точек зрения водо — и жирорастворимые экстракты пыльцы для определения их антигенности и естественной сопротивляемости ; результаты следующие:


1. Анализ способности водо — и жирорастворимого экстрактов производить антитела при использовании сывороток от иммунизированных кроликов дал отрицательные результаты во всех случаях. Эти результаты определяли реакцией преципитации (метод Оухтерлонн). Величины, полученные для теста гемагглютинации, были слегка повышены для сыворотки кроликов, иммунизированных водорастворимым экстрактом, но не для сыворотки кроликов, иммунизированных жирорастворимым экстрактом.

2. Были проведены наблюдения над вызыванием анафилактического нижа у морских свинок, сильно сенсибилизированных водо — и жирорастворимым экстрактами, но результаты были отрицательными

во всех случаях.

3. Наблюдали также явление Артуса у кроликов, сильно сенсибилизированных водо — и жирорастворимым экстрактами. Когда в качестве антигена использовали водорастворимый экстракт концентрацией 15 мг/мл, наблюдали легкую красноту у кроликов, иммунизированных водорастворимым экстрактом. При пониженных концентрациях того симптома не появлялось Результаты были отрицательными всех кроликов, иммунизированных жирорастворимым экстрактом.

В заключение можно сказать, что обе вытяжки пыльцы — водорастворимая и жирорастворимая в худшем случае вызывают весьма пониженную степень антигенности или естественной сопротивляемости.

[Admin]

Цветочная пыльца

Цветочную пыльцу мы рассматриваем в связи с ее огромным значением для пчелиной семьи, а также с точки зрения той перспективной роли, которую она будет играть в сохранении здоровья человека ввиду ее питательных и лечебных свойств.


Вероятно, и в будущем пчела останется важным поставщиком разнообразной и высококачественной пыльцы для нужд человека.

Цветочная пыльца представляет собой мужские половые клетки цветущих растений, которые образуются в пыльниках, расположенных в расширенной части тычинок. Когда пыльца созревает и становится годной для опыления, пыльники лопаются, а пыльца высыпается и разносится ветром или насекомыми.

Попадая на рыльца пестиков цветов, пыльца прорастает и оплодотворяет женские половые клетки. Пыльцевые зерна невидимы простым глазом, но встречаются растения, у которых они соединяются по нескольку вместе, а иногда даже собраны в общую массу. Внешняя оболочка зернышек состоит из клетчатки и трудно переваривается. Пыльцевые зерна каждого вида растения имеют определенную форму, размер, окраску и рисунок. Благодаря этому под микроскопом можно определить с какого вида растения взята пыльца или с каких цветков пчела собирает нектар. Размер пыльцевых зерен различных растений варьируют от 0,020 до 0,050 мм в диаметре, реже до 0,15—0,20 мм.

[Admin]

Пыльцевые зерна
По форме пыльцевые зерна могут быть круглыми, эллипсовидными, треугольными, поверхность их может быть шероховатой, ребристой, покрытой шипами и т. д. Так, например, пыльцевые зерна акации имеют треугольную форму, валерианы лекарственной — покрыты шипами, вербы — эллипсовидную форму, подсолнечника — шаровидную с шипами.

Окраска пыльцевых зерен различных растений также разнообразна: валерианы лекарственной — коричневая, подсолнечника — желтая, акации — беловатая. При хранении окраска пыльцевых зерен изменяется. Цветы различных растений содержат различное число пыльцевых зернышек. Так, например, один цветок яблони содержит до 100 000 пыльцевых зерен, лещины — до 1 000 000 и т. д. Пчелы собирают чаще всего пыльцу с одного вида растений и только при отсутствии однородных цветков они вынуждены собирать ее с различных растений. За один день пчела собирает 0,008—0,115 г пыльцы.

[Admin]

Как пчелы собирают цветочную пыльцу
Цветочную пыльцу, смешанную с нектаром растений и слюной, пчелы собирают в корзиночки, расположенные на задних ножках, и переносят ее в улей. Там пчелы ее накапливают в отдельных ячейках и хорошо утрамбовывают. Обычно эти ячейки расположены в виде венца над расплодом.

Ячейки заполняются пыльцой не более чем на 2/3—4/5 высоты, в среднем в них вмещается 0,100—0,175 г пыльцы. Пыльцы из одной ячейки достаточно, чтобы выкормить двух личинок. Чтобы предохранить пыльцу от плесневения, пчелы заливают ее сверху медом.

Такая пыльца называется пергой, она сохраняется продолжительное время. В незапечатанных ячейках пыльца зимой плесневеет от сырости. Под влиянием ферментов пчелиной слюны, меда и пыльцевых зерен, а также попадающих в «ячейки бактерий, в перге постепенно происходит распад содержащихся в ней белковых, углеводных, жировых и других веществ, обусловливающий изменение химического состава и питательных свойств.

Так, Маурицио установила, что перга после 3-месячного хранения теряет 20—25% своей питательной ценности, после высушивания на солнце или одногодичного хранения — 40—50%, а по истечении двух лет становится бесполезной.

[Admin]

Химический состав пыльцы
Химический состав пыльцы зависит от вида растений. Пыльца содержит 7,02—29,8% белковых веществ, 0,94—11,44% жиров, 18,82—41,20% Сахаров, 0,7—16,29% воды, 0,91—6,36% зольных веществ.

Из минеральных веществ в пыльце обнаружены силиций, сера, медь, кобальт, натрий, железо, алюминий, кальций, магний, марганец, фосфор, барий, серебро, цинк, хром, стронций и др. (Виноградова, Зайцев, 1966).

В пыльце обнаружены и некоторые аминокислоты. По данным Вевера, Нильсона, Кикинена, пыльца содержит аргинин, гистидин, изолейцин, лизин, метионин, фенилаланин, трионин, триптофан, валин.

[Admin]

Содержание витаминов в цветочной пыльце
Содержание витаминов, по результатам исследований Гайдака, Вивино, Нильсона, составляет: В1 (тиамин, аневрин) в перге 3,8—5,0 мкг%, в обножке* 6,3—10,8 мкг%, В2 (рибофлавин, лактофлавин) соответственно 15—34 мкг% и 16,3— 19,2 мкг%, В6— (пиридоксин,. адермин) в пыльцевых зернах не обнаружен, а в обножке содержится 3,1—6,3 мкг%, никотиновая кислота (В3, РР, никотинамид) — 16,0—27,6 мкг% и биотин (витамин Н) — 0,52—0,69 мкг% обнаружены только в обножке.

Обножка — цветочная пыльца, смоченная нектаром и слюной пчелы, скатанная в комочек и уложенная в корзиночки ее задних ножек (Прим. Г. Д. Билаша).